重組人CKMM同工酶ERM-AD455在不同保存基質(zhì)中的穩(wěn)定性和互通性觀察：
重組酶應(yīng)用時對其穩(wěn)定性有嚴(yán)格的要求。研 究對酶溶液 -20℃ 冷凍保存的穩(wěn)定性做了初步觀 察,發(fā)現(xiàn)未加穩(wěn)定劑時重組酶活性喪失很快。在含 有 ＢＳＡ、ＤＴＴ和 ＥＤＴＡ的基質(zhì)中保存于 -20℃或在 具以上穩(wěn)定劑基質(zhì)中加入抗凍劑丙二醇,重組 CKMM同工酶的穩(wěn)定性相對較好,仿 ＣＲＭ 配方基質(zhì)中重組酶 的短期 穩(wěn) 定 性 也 較 好,保 存 時 間 與 Ｒｏｃｈｅ公 司 產(chǎn) ｃｆａｓ校準(zhǔn)品復(fù)溶后冷凍保存穩(wěn)定時間接近。一般認(rèn) 為人血清作為參考品基質(zhì)其基質(zhì)效應(yīng)小，研究將 重組CKMM同工酶保存于人血清中,穩(wěn)定性不好,可能是 人血清中含有蛋白水解酶或抑制物等,更易造成酶 失活。酶的CKMM同工酶ERM-AD455都是凍干品,其穩(wěn)定期長,以凍干 品的形式長期保存酶參考品應(yīng)該是可行的方法。
羅氏和中生北控 ＣＫ常規(guī)測定方法對 ＩＦＣＣ參 考方法做相關(guān)回歸發(fā)現(xiàn),無論在 CKMM同工酶還是在 ＣＫ- ＭＢ升高組常規(guī)方法與參考方法間具良好的兩兩相 關(guān)性,相關(guān)系數(shù)大于 0.99。但兩組樣本用羅氏方法 測定的結(jié)果比參考方法分別偏高 1.96%和 2.23%, 而中生 北 控 的 方 法 的 測 定 值 比 參 考 方 法 分 別 低 8.63%和 10.29%。顯 然,經(jīng) 過 溯 源 校 準(zhǔn) 的 羅 氏 試 劑測定的準(zhǔn)確度明顯優(yōu)于只 采 用 Ｋ值 輸 入 而 未 經(jīng)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)的中生北控國產(chǎn)試劑。
研究觀 察 了 保 存 于 自 配 基 質(zhì)、抗 凍 基 質(zhì)、仿 CKMM同工酶ERM-AD455配方基質(zhì)和人血清基質(zhì)中重組 CKMM同工酶的互通 性。結(jié)果自制基質(zhì)和仿 ＣＲＭ配方基質(zhì)中的重組酶, 在高、中、低不同水平時都具有良好的互通性,而抗 凍基質(zhì)和人血清基質(zhì)配方中的重組酶只有位于診斷 限附近的低值有互通性。我們對重組酶的酶動力學(xué) 研究發(fā)現(xiàn),底 物 磷 酸 肌 酸 的 米 氏 常 數(shù) (Ｋｍ)重 組 酶 明顯高于天然酶,因此在現(xiàn)有測定方法下重組酶的 測定上限低于天然酶,這可能是高濃度值互通性差 的重要原因之一 。
綜合對重組酶穩(wěn)定性和互通性的研究發(fā)現(xiàn),加 入穩(wěn)定劑的類人血清自制基質(zhì)和仿 CKMM同工酶ERM-AD455 配方基質(zhì) 中保存的重組酶具有較好的應(yīng)用前景。為保證其穩(wěn) 定性,需進(jìn)一步制備凍干品,并觀察凍干品在不同保 存溫度的穩(wěn)定性。該重組酶真正作為 ＣＫ候選參考 物質(zhì)應(yīng)用于臨床還有許多問題需要解決,包括冷凍 干燥品復(fù)溶后的穩(wěn)定性和互通性,將此重組酶作為 參考品并予以賦值用于常規(guī)測定的校準(zhǔn) 能否減 小室間變異等,都需要進(jìn)一步觀察。
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陳經(jīng)理（銷售）
