產品名稱：NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒(HPV)16型DNA(第一國際標準)
英文名稱：Human Papillomavirus (HPV) Type 16 DNA (1st International Standard)
品牌：WHO國際標準品NIBSC
類別：國際標準
| 產品編號 | 規格 | 貨期 | 銷售價 | 您的折扣價 |
|---|---|---|---|---|
| 06/202 | 1支 | 8周 | 3080 | 立即咨詢 |
- COA
- MSDS
1. 預期用途
用于 HPV 16 型 (HPV16) DNA 的第一個國際標準基于核酸的測定由冷凍干燥的制備物組成含有全長 HPV16 DNA 的重組質粒 pBR322 被克隆通過其獨特的 BamH1 站點 (Quint et al., 2006)。該標準已在純化的人類基因組 DNA 的背景下配制，凍干在 0.5 ml 等分試樣中并儲存在 -20 °C。材料經過校準涉及 19 個實驗室的國際合作研究（Wilkinson 等人，2010）。國際標準包含的材料是專有的第三方，應僅用于內部校準或HPV-16擴增檢測的工作標準脫氧核糖核酸。國際標準不應用于任何其他用途，使用后應丟棄。
2. 注意
NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型(標準品）不適用于人類食物鏈中的人類或動物。
該材料含有源自 C33A 細胞的 DNA。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應被視為對健康有潛在危害。應根據您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應包括戴防護手套和避免產生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應小心謹慎，以免割傷。
3. 單元
HPV16 DNA 的第一個國際標準（NIBSC 代碼 06/202）已規定為每安瓿 5 x 10^6 國際單位 (IU) 的單位。
可追溯性聲明：
在 2008 年 1 月的一次 WHO 會議上（WHO 會議報告，2008 年）提出，HPV16 DNA 國際標準的使用說明包括用于確定所用散裝材料的理論 HPV16 基因組當量 (GEq) 的計算和假設在制定國際標準時，證明 1 IU 相當于 1 GEq 用于 HPV16 DNA。因此，第一個 WHO HPV16 DNA 國際標準的最終統一仍然是 IU，而可追溯性聲明將允許用戶將 IU 等同于 GEq。
在新墨西哥大學 (UNM) 的 Cosette Wheeler 博士的實驗室中進行了重組 HPV16 質粒儲備制劑的 DNA 濃度測定。 DNA濃度通過260 nm處的吸光度以及使用Picogreen測定法（Invitrogen Corporation，USA）的分光熒光法測定。在兩次 DNA 測量之間獲得了 0.95 或更高的相關系數。將 10 ng HPV16 質粒 DNA/μl 提供給 NIBSC 用于配制用于隨后冷凍干燥的散裝材料。 UNM 實驗室還向 NIBSC 提供了一份聲明，表明 HPV16 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.17 ng/μl。因此，10 ng HPV-16 質粒 DNA/μl 質粒儲備液相當于 8.547 x 1011 HPV-16 GEq/ml。 NIBSC 在制定第一國際標準時使用了這些數據
用于 HPV 16 型 DNA。
用于 HPV 16 型 DNA 的第一個國際標準（NIBSC 代碼 06/202）的散裝材料配方：
在 NIBSC，根據公式制備大量 HPV16 質粒 DNA 材料：
HPV GEq/ml 散裝材料 = (HPV GEq/ml 質粒原液 x 體積質粒原液)/體積散裝材料。
因此，HPV16 GEq/ml 散裝材料 = (8.547 x 1011 HPV-16 GEq/ml 質粒原液）x（0.02223 ml HPV-16 質粒原液）/1900 ml HPV-16 散裝材料 = 1.0 x 107 HPV-16 GEq/ml散裝材料 HPV-16 DNA 散裝材料隨后以 0.5 ml 等分試樣冷凍干燥。
第一次將 IU 等同于 GEq 需要某些假設HPV16 DNA 的國際標準：
1) HPV16 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.17 ng/μl。
2) 凍干后 HPV16 DNA 的活性沒有損失。
3) 重組HPV-16質粒DNA準確模擬了生物樣本中HPV16病毒DNA的活性。
獨立計算重組 HPV-16 質粒的 GEq/ml脫氧核糖核酸。
NIBSC 還使用 BioEdit 序列比對編輯器 v7.0.5.3 (Tom Hall, Isis 制藥公司，美國）。用于確定分子量的序列是用于 pBR322 的 GenBank 登錄號 J01749.1 和用于 HPV16 的參考序列（登錄號 K02718）。
NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型(標準品）
生物編輯數據DNA分子：HPV16 Accession K02718
長度 = 7904 個堿基對
MW= 4786756.00 道爾頓，雙鏈
DNA分子：克隆載體pBR322
長度 = 4361 個堿基對
MW= 2653867.00 道爾頓，雙鏈
公式 HPV 質粒原液的 GEq/ml 根據公式計算：
HPV 質粒原液的 GEq/ml = (HPV 質粒原液的 DNA 濃度) x (HPV DNA 的 MW + pBR322 的 MW)-1 x (阿伏伽德羅數) 其中阿伏伽德羅數 = 6.022x1023 分子/mol
根據以下公式計算大量 HPV DNA 材料的 GEq/ml：
HPV GEq/ml 散裝材料 = (HPV GEq/ml 質粒原液 x 體積質粒原液)/體積散裝材料。
計算 將重組 HPV16 質粒原液以 10 ng/μl 的濃度提供給 NIBSC。
使用上面顯示的 MW 測定，HPV16 質粒原液的 GEq/ml 為：
= (10 x 10-9
g/μl) x (mol/(7440623 g) x (6.022x1023 分子/mol)
= 8.093 x 108 分子/μl
= 8.093 x 1011 分子/毫升
= 8.093 x 1011
HPV16 GEq/ml
將 22.23μl 重組 HPV16 質粒原液稀釋至終體積為 1900ml，因此，HPV-16 GEq/ml 散裝材料 = (8.093 x 1011 HPV16 GEq/ml 質粒原液) x (0.02223 ml HPV16 質粒原液) / 1900 ml HPV16 散裝材料 = 0.947 x 107 HPV16 GEq/ml 散裝材料
4. 內容
生物材料原產國：英國。
每個安瓿含有相當于 0.5 ml HPV16 的凍干粉
質粒 DNA 在 10mM Tris 緩沖液 pH7.4 中含有 1mM EDTA、5 mg/ml 海藻糖和 ~1 x 106 人 Geq/ml 源自 C33a 細胞。
5. 存儲
收到時，安瓿瓶應存放在 -20 °C 或以下。
請注意：由于凍干材料固有的穩定性，NIBSC 可能會在環境溫度下運輸這些材料。
6. 開瓶指南
DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型安瓿破膠劑是市售的。打開
安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標記）端的材料，并按照安瓿破碎機提供的制造商說明進行操作。
NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型(標準品）
7. 材料的使用
在重新配制之前，不應嘗試稱量凍干材料的任何部分。
HPV16 DNA 的第一個國際標準包含高拷貝數模板。 HPV16質粒的風險很高
打開玻璃安瓿時通過霧化造成 DNA 污染。材料必須在單獨的實驗室環境中打開和處理，遠離試劑、實驗室器具和樣品等其他預放大組件。
該材料以凍干形式提供，使用前應在 0.5 ml 無菌無核酸酶水中復溶。確保安瓿的內表面被添加的水潤濕，以便重組粘附在玻璃上的任何凍干材料顆粒。
重組材料的最終濃度為 1 X 10^7 IU/mL。
重組材料適用于校準內部或工作標準，以擴增和檢測 HPV16 DNA。該材料不適用于校準或評估提取、沉淀或離心程序。 NIBSC 可以為在提取步驟無法與擴增步驟分離的分析中使用 HPV16 DNA 國際標準（例如進樣、應答平臺）提供指導。該材料未針對人類 DNA 核酸擴增技術進行校準。
陳經理（銷售）
